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              产品选择指南

              技术服务信息

              机构用户解决方案

              Capturem Trypsin
              品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 数量
              Clontech 635722 20 rxns 3,155 元
               
              ■ 产品简介
              蛋白质质谱分析前的样品消化步骤,通常需要4个小时甚至过夜,如果使用Capturem Trypsin 或 Capturem Pepsin,可在室温下快速,高效和完全的消化蛋白质,从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式,应用新型膜技术,膜上固定有胰蛋白酶(Trypsin)或胃蛋白酶(Pepsin),在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品,与传统的溶液法过夜处理相比,时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少,避免发生过度消化。
               
              ■ 快速、简单的操作流程
              Capturem Trypsin 和 Capturem Pepsin包含小型离心柱和活化buffer,操作流程简单、快速,只需要加入200 μl活化buffer离心1 min,然后加入蛋白质样品再离心1 min,即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。
               
               
              ■ 产品特点
              ·操作快速,2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品,无需过夜处理
              ·比溶液法效率更高,酶解更彻底
              ·样品中自溶片段更少,蛋白质非特异性修饰几率更低
              ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯,实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定
               
              ■ 应用
              ·蛋白质鉴定
              ·蛋白质组学分析
              ·质谱样品制备
              ·抗体鉴定
               
              ■ 实验例
               
              使用Capturem Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分(图A),然后再使用Capturem Trypsin对每个组分单独酶解,并使用LC/MS-MS分析,每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出,如B图所示。
               
              使用Capturem Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin(Apo)酶解。上图为使用RP-HPLC分析Capturem Trypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果,图A为未酶解的完整蛋白质,图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质,图C为使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白质,结果显示使用Capturem Trypsin酶解的非常彻底。
               
              使用Capturem Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析,图A为未酶解的完整蛋白质,图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质,图C为使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白质,结果显示使用Capturem Trypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。
               
              Capturem Pepsin的操作流程。在酶消化之前,抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后,将还原处理后的抗体样品溶液(50-800 μl)加入离心柱中,离心1分钟。 在这个过程中,柱上发生胃蛋白酶消化,随后再一次离心洗脱即可获得肽片段,加入NaOH中和洗脱的肽片段,即可用于下游分析。
               
              使用Capturem Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取
              100 μg,使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作,然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem Pepsin对稀释的样品进行消化,通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品(各取4 μg)进行检测,如上图所示。
               
              不同批次的Capturem Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo,选择3个不同批次的Capturem Pepsin对其进行消化,HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段,说明Capturem Pepsin具有良好的重复性。
               
              Capturem Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化,分别是Capturem Pepsin,pepsin溶液法孵育4小时,pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出,使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多,说明产生了过度消化,而使用Capturem Pepsin则没有这个问题。
               
               
              产品详情请点击以下链接:
              https://www.takarabio.com/products/protein-research/mass-spectrometry-reagents/
              protein-digestion-capturem-trypsin-and-pepsin
               
               
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